Diabetologia：激活但功能受损的遗忘Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到去甲自身肝细胞到用到1型式乳癌流行病学患者的的持续发展叛将在孩童时期就有很好的描绘出，多个去甲自身肝细胞无症状的孩童里面有70%在胰岛素转换后10年末患上乳癌，而随访15年的孩童这一数量提高到84%。比较于，占有流行病学1型式乳癌一半以上的型式1型式乳癌的确诊组态还不能得到合理的学妖术研究。

更加多的人开始应用于分期系统来定义1型式乳癌的的持续发展：个体在用到多种去甲自身肝细胞时转入第1过渡期，用到皮质醇异常时转入第2过渡期，用到患者时转入第3过渡期。一些多发去甲自身肝细胞无症状的个体，在1期和2期，的持续发展较太快，并持续发展为确诊的1型式乳癌。我们之前描绘出了一小组在首次监测到多种去甲自身肝细胞样本后据估计10年无乳癌的极太快的持续发展者，这小组病患人数少，但相似性相当明确。随后，我们推测去甲自身肝细胞选择性CD8+T蛋白质重排在的持续发展缓太快的病患里面理论上不假定，但在近期确诊和长期假定的乳癌病患里面很容易监测到。这可能表明，与的持续发展病患比较于，这些病患神经性重排的平衡增强。

20世纪学妖术研究表明，尽管平衡性T蛋白质(Treg)数目正常，但乳癌病患假定一些系统缺陷，其里面包括对IL-2的重排意志力降低。此外，乳癌病患里面的不稳定性CD4+T蛋白质可能对平衡更具抵抗性，平庸为不稳定性T蛋白质的消除减弱，大自然激发的Treg和游离激发的作用于Treg，以及肝细胞经历的CD4+T蛋白质里面IL-2重排减弱。本学妖术研究的目的是描绘出了CD4+平衡性T蛋白质(Treg)在一小群极缓太快的持续发展者里面的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX学妖术研究是一项以人群结合的纵向学妖术研究，在21岁以下肺炎的病患亲属里面安全检查1型式乳癌的险恶因素所。我们之前描绘出了长期缓太快的持续发展者的相似性，他们保持多重去甲自身肝细胞无症状超过10年，但不能用到乳癌的流行病学患者，太快性或非展开性神经性。随后，10名继续保持无乳癌并愿意发放大量体内样本的缓太快的持续发展者纳入T和B蛋白质系统归纳。在目前的学妖术研究里面，8名太快的持续发展者(SP小组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的去甲自身肝细胞无症状。所有的组织者都位处1型式乳癌的持续发展的1期，尽管一些人随后失掉了去甲自身肝细胞对某些肝细胞的黄疸，然而，一名病患仍未位处2期据估计6年，但不能用到流行病学患者，一名病患被诊断为乳癌，该受试者72岁，在热带植物实验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里面对该NADPH展开了基本上指标。转化外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采行多参数流式蛋白质妖术和T蛋白质消除次测试指标NADPH里面Treg的基频、表型式和系统。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)展开无指派聚类归纳，指标Treg表型式。

结果：与身体健康NADPH比较于，来自太快的持续发展体的无意识CD4+T蛋白质的指派聚类表明，激光阴的无意识CD4+ Treg基频提高，与止痛药作用于的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来提高有关。一名HbA1c上升时的病患与的持续发展缓太快者和归一化的对照小组比较于，Treg小曲有所不同。系统归纳表明，与身体健康NADPH比较于，来自缓太快的持续发展体的Treg介导的CD4+不稳定性T蛋白质消除微小毁损。平庸为对不稳定性CD4+T蛋白质CD25和CD134表达出来的消除提高。

平面图1 侧重的表型式归纳表明，CD4+Treg亚型式在太快的持续发展函数调用里面提高。由FlowSOM分解成的Treg室，群聚在来自所有NADPH的光阴CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标明物表达出来比对出10个元簇:无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)应用于9个不同Treg标明分解成的10个元簇的MST。每个路由表代表人一个空降兵(100个空降兵)，很大的元空降兵(10个元空降兵)在路由表小组周遭剪裁。每个路由表里面的甜品平面图说明单个标明的表达出来级别。(b)每个元聚类的热平面图，以表明整体标明表达出来。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)分解成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较轻元素为每个metacluster筒支线平面图(轻元素> 0.05%)明确为HD和SP小组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白质(l)。橘色圆圈代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检测。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 应用于CITRUS的预测模型式推测，Treg基频的提高是的持续发展缓太快的标识。分级门控(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP组织者和归一化的HD组织者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的不同。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表人性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR表达出来展开转化，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)小组以及NADPHSP 606(橘色)里面CD25+ cd127的基频摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控邻域的筒支线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度渐变，记号凸显的簇被识别为SP和HD函数调用相互间的不同。(j)筒支线平面图表明了在SP(黑斑)和HD(灰点)小组里面，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比较轻元素(数量)。(k)直方平面图表明每个簇的表型式(粉红色)和Treg标明比较表达出来与背景表达出来(蓝色);上列，闪存Treg_3;下面恰巧，闪存Treg_4。背景与所有其他簇里面标明的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检测

平面图3 与身体健康献血者比较于，的持续发展缓太快者无意识treg的GITR提高。每个无意识CD4+T蛋白质元簇(无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表达出来标明的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表达出来热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表达出来串联，表明直方平面图(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon配对标记秩和检测，p< 0.07(橘色)所有NADPH包括，p< 0.05(蓝色)NADPHSP 606和归一化的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表达出来，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)串联，表明直方平面图(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩检测

平面图4 来自缓太快的持续发展的CD4+ treg蛋白质控制不稳定性CD4+T蛋白质的意志力降低。SP小组用蓝色的支线和圆圈说明，HD小组用黑色的支线和圆圈说明，橘色的支线/圆圈说明NADPHsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质展开分选。CD4+CD25−(转发者)被标明为CFSE, Treg按注意到的数量溶液。用抗CD3 /28微珠再造蛋白质，培训3天后展开流式蛋白质妖术监测。(a-d)与CD4+转发者比较应的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除总和。应用于无症状对照(激光阴的响应蛋白质不含treg)量度消除总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 不稳定性CD4+T蛋白质对缓太快的持续发展的T蛋白质再造的消除更敏感。SP小组用蓝色的支线和圆圈说明，HD小组用黑色的支线和圆圈说明，橘色的支线/圆圈说明NADPHsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质展开分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标明，treg按注意到的数量溶液。用抗CD3 /28微珠再造蛋白质，培训3天后展开流式蛋白质妖术(CD25反染)和蛋白质因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除前年(b)。(c,d) CD25消除前年(c)和CD134消除前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里面的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推断的结论是，来自缓太快的持续发展子的再造无意识CD4+Treg在GITR表达出来里面得到了扩展和丰富，强调了全面学妖术研究Treg在1型式乳癌几叛将个体里面的异质性的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28